コラーゲン技術研修会

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細胞外マトリックス研究法

細胞外マトリックスを構成する分子群の性質は大きく異なっている。それら分子群の分離・分析・精製・同定・機能の解析を解説したシリーズ
第Ⅰ部.生化学的研究法

1章.コラーゲン

基礎知識

a. 型別コラーゲンの精製・同定法

(1)Ⅰ・Ⅲ型コラーゲン

(2)Ⅳ型コラーゲン

(3)Ⅴ型コラーゲン

(4)Ⅵ型コラーゲン

(5)軟骨型(Ⅱ・Ⅸ・Ⅹ・Ⅺ型)コラーゲン

(6)ⅩⅡ・ⅩⅣ型コラーゲン

(7)ⅩⅦ型コラーゲン

(8)魚類および無脊椎動物コラーゲン

b. コラーゲンの分析法

(1)SDSポリアクリルアミド電気泳動

(2)ブロムシアン分解

(3)変性温度の測定法

(4)アミノ酸配列の解析・試料調製法

(5)架橋の分離と定量法

 

2章.細胞接着性糖蛋白質

基礎知識

a.フィブロネクチンの精製・同定法

b.ラミニンの分離・同定法

c.ラミニン5の精製・同定法

d.ビトロネクチンの精製・同定法

 

3章.グリコサミノグリカン

基礎知識

a.グリコサミノグリカンの分離・精製

b.グリコサミノグリカンの電気泳動による分離・同定

c.グリコサミノグリカン鎖の分析

 

4章.プロテオグリカン

基礎知識

プロテオグリカンの精製・分析法

 

5章.エラスチン

基礎知識

エラスチンの精製・分析法

 

水野一乘・林利彦

 

蛯原哲也・服部俊治

中里浩一・林利彦

水野一乘・林利彦

今村保忠・林利彦

新井克彦

圷信子・西山敏夫

平子善章・尾張部克志

蛯原哲也・入江伸吉

 

服部俊治

服部俊治

服部俊治

服部俊治

平山直美・飯島克昌・入江伸吉

 

 

林正男

深井文雄

熊谷知乃・川口信子・北川泰夫

天野聡・西山敏夫

林正男

 

 

畑隆一郎

畑隆一郎

畑隆一郎

木下亜希子・菅原一幸

 

 

大平敦彦

大平敦彦

 

 

山本清高・山本満里

山本清高・山本満里

第Ⅱ部.免疫学的・酵素学的研究法
第Ⅱ部.免疫学的・酵素学的研究法

1章.抗体作製法

基礎知識

a. ポリクローナル抗体

b. モノクローナル抗体/マウス

c. モノクローナル抗体/ラットリンパ節法

 

2章.免疫化学的解析法

基礎知識

a.ELISA法

b.ウエスタンブロッティング法

 

3章.マトリックス分解系の解析法

基礎知識

a.細胞外マトリックス分解酵素の活性測定

b.ゼラチン・ザイモグラフィー

c.グリコサミノグリカン分解酵素のザイモグラフィー

 

4章.TIMPの定量と機能解析法

基礎知識

a.TIMPの定量法

b.TIMPの細胞増殖活性測定法

 

新井克彦

新井克彦

新井克彦

佐渡義一

 

 

服部俊治

服部俊治・染木衣応里・入江伸吉

服部俊治・白井朋子

 

 

服部俊治

服部俊治

新井克彦・白井朋子・服部俊治

山形貞子・山形達也

 

 

早川太郎

山下京子・早川太郎

山下京子・早川太郎

第Ⅲ部.遺伝子解析法

1章.遺伝子クローニング

基礎知識

a.ライブラリーからのクローニング

(1)cDNAライブラリーのつくり方

(2)cDNAライブラリーからのスクリーニング

(3)ゲノムライブラリーからのスクリーニング

b.PCR法とクローニング

(1)RT-PCRとcDNAからのクローニング

(2)ゲノムDNAからのクローニング

c.抗体を利用したクローニング

 

2章.遺伝子の構造解析

基礎知識

a.サザンブロッティング

b.ライゲーションとトランスフォーメーション

c.プラスミドの分離・精製

d.塩基配列の解析・試料調製法

 

3章.遺伝子発現解析法

基礎知識

a.RNAの調製とノーザンブロッティング

b.mRNAの調製と非RIノーザンブロッティング

c.RNアーゼプロテクションアッセイ

d.in vitro核転写法(Run off assay)

 

4章.外来遺伝子の導入とその発現解析法

基礎知識

a.リン酸カルシウム法

b.リポソーム(リポフェクション)法

c.エレクトロポーション法

d.CATアッセイ

e.β-ガラクトシダーゼアッセイ

f.デュアルルシフェラーゼアッセイ

 

5章.データのコンピュータ処理法

a.データの処理とグラフの作成

b.図・写真のコンピュータ処理

 

畑隆一郎

 

吉岡秀克

吉岡秀克

吉岡秀克

 

新井克彦

畑隆一郎

藤原作平

 

 

畑隆一郎

新井克彦

畑隆一郎

畑隆一郎

新井克彦

 

 

畑隆一郎

畑隆一郎

新井克彦

新井浩司・新井克彦

倉田俊一

 

 

畑隆一郎

吉野智亮・吉岡秀克

畑隆一郎

白井朋子・服部俊治

吉野智亮・吉岡秀克

吉野智亮・吉岡秀克

畑隆一郎

 

 

加藤博明

加藤博明

第Ⅳ部.機能解析法 上

1章.組織からの細胞分離と培養系の確立

基礎知識

a.皮膚

(1)皮膚線維芽細胞

(2)表皮角化細胞/ヒト・マウス

(3)表皮角化細胞/ラット

b.肝

(1)肝臓実質細胞

(2)肝臓非実質細胞

c.腎/腎メサンギウム細胞

d.脳/脳アストログリア細胞

e.眼

(1)網膜色素上皮細胞

(2)角膜細胞

f.骨・軟骨

(1)骨芽細胞

(2)軟骨細胞

g.心・血管

(1)心筋細胞・心線維芽細胞

(2)血管内皮細胞・平滑筋細胞

 

2章.培養法の応用と生合成実験

基礎知識

a.培養法の応用

(1)コラーゲンゲル培養法

(2)マトリックス培養法

(3)スフェロイド培養法

(4)温度応答性培養皿

(5)活性持続型ビタミンCを用いた3次元培養法

b.生合成実験

(1)コラーゲン合成活性測定法

(2)フルオログラフィー

(3)グリコサミノグリカン合成活性測定法

(4)細胞増殖活性測定法

 

畑隆一郎

 

畑隆一郎

服部俊治

新井克彦・神山雅子

 

畑隆一郎

妹尾春樹

友野靖子

望月理加・新井克彦

 

気賀沢一輝

鈴木克佳・西田輝夫

 

加藤博明

開祐司

 

玉盛三美・伊藤宏

山本清高・山本満里

 

 

畑隆一郎

 

畑隆一郎

妹尾春樹・佐藤充

小出典男

串田愛・大和雅之・菊池明彦・岡野光夫

畑隆一郎

 

畑隆一郎

畑隆一郎

畑隆一郎

畑隆一郎

第Ⅳ部.機能解析法 下

3章.細胞外マトリックス接着機構

基礎知識

a.細胞の細胞外マトリックスへの接着機構

b.細胞接着に関与するインテグリンの分離・同定

c.人工マトリックスによる細胞接着機構

d.インテグリンシグナル伝達機能

 

4章.疾患モデルと遺伝子導入動物

基礎知識

a.疾患モデルの作成とその応用

(1)コラーゲン関節炎

(2)自己免疫性皮膚疾患

(3)自己免疫性腎疾患

(4)肝硬変

(5)糖尿病

(6)動脈硬化症

b.遺伝子導入動物の作成とその利用

(1)トランスジェニックマウス

(2)ノックアウトマウス

 

関口清俊

高木淳一

岩本資己

前田利長

宮本新吾

 

 

新井克彦

 

垣本毅一

藤原作平

佐渡義一

妹尾春樹

新井克彦・三浦豊・吉澤史昭

山根徹

 

妻木範行・木村友厚

渡辺秀人

第Ⅴ部.細胞・超分子形態解析法

1章.光学顕微鏡レベル

基礎知識

a.組織処理法/結合組織染色法

b.免疫組織化学

c.共焦点レーザー顕微鏡

 

2章.電子顕微鏡レベル

基礎知識

a.組織・細胞

b.免疫電子顕微鏡法

 

3章.分子レベル・分子の集合体レベル

基礎知識

a.SLSの作製と観察法

b.シャドーイングによる分子の観察

 

4章.原子間力顕微鏡

基礎知識

原子間力顕微鏡による細胞外マトリックスの観察法

 

5章.In situハイブリダイゼーション

基礎知識

a.RI法

b.非RI法

 

新井克彦

妹尾春樹・三浦光隆

新井克彦

小嶋直介

 

 

妹尾春樹・今井克幸

妹尾春樹・今井克幸

妹尾春樹・今井克幸

 

 

小林邦彦

小林邦彦

藤田芳和・小林邦彦

 

 

小林邦彦

藤田芳和・小林邦彦

 

 

新井克彦

猪山賢一

新井克彦